Particules Lentivirales d'Activation (h) MEK-5: sc-401688-LAC

MAP2K5 code pour MEK-5, une kinase MAPK à double spécificité qui agit en amont d’ERK5 (MAPK7) afin de transmettre les signaux extracellulaires vers des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération, la différenciation, la survie cellulaires et les réponses au stress. L’activation de MEK-5 intègre des signaux issus des facteurs de croissance et du stress cellulaire pour réguler des effecteurs nucléaires, notamment les facteurs de transcription de la famille MEF2, façonnant ainsi le remodelage du cytosquelette et des phénotypes associés à la migration. La dérégulation de l’axe MEK5–ERK5 a été associée à une signalisation de croissance altérée et à un comportement invasif dans divers contextes pathologiques, faisant de MAP2K5 une cible fréquente des études de cartographie des voies de signalisation et de génomique fonctionnelle. En tant que kinase nodale des cascades MAPK, MEK-5 constitue un levier expérimental commode pour disséquer les interactions entre voies de signalisation (crosstalk) et les modifications de l’expression génique en aval dans des cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MEK-5 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MAP2K5 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MEK-5 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MAP2K5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MEK-5. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MAP2K5 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.