Med6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403204

Übersicht

MED6 kodiert Med6, eine essenzielle Untereinheit des Mediator-Komplexes, der sequenzspezifische Transkriptionsfaktoren mit der RNA-Polymerase II verbindet, um die Transkriptionsinitiation und die Promotorantwort zu koordinieren. Durch die Unterstützung von Zusammenbau und Stabilität der Präinitiationsmaschinerie trägt Med6 zur Regulation zellzustandsspezifischer Genexpressionsprogramme bei, einschließlich Signalwegen, die Proliferation, Differenzierung und stressadaptive Transkription steuern. Eine veränderte Mediator-Funktion kann globale Transkriptionsausgänge umformen und wird häufig im Kontext onkogener Signalgebung, entwicklungsbedingter Fehlregulation und transkriptionsassoziierter Genominstabilität untersucht. Eine Störung von MED6 bietet daher einen gut zugänglichen Ansatzpunkt, um zu analysieren, wie Mediator-abhängige Transkription in menschlichen Zellen Signaleingänge in Chromatin- und RNA-Polymerase-II-Aktivität integriert.

Das Med6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MED6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MED6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MED6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Med6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MED6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Med6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MED6-Exone abzielen, die für die Med6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MED6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Med6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Med6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MED6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Med6 HDR-Plasmid (h) und Med6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MED6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MED6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.