Med6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403204-ACT

O MED6 humano codifica a Med6, uma subunidade essencial do complexo Mediator que conecta fatores de transcrição específicos de sequência à RNA polimerase II para regular o início da transcrição. A Med6 auxilia a montagem e a função do complexo de pré-iniciação e contribui para o controle amplo de programas de expressão gênica ligados à progressão do ciclo celular, diferenciação e sinalização responsiva ao estresse. Como co-regulador transcricional central, alterações em MED6 podem influenciar vias que governam a transcrição dependente de cromatina e a estabilidade global do transcriptoma. A atividade desregulada do Mediator tem sido implicada em redes transcricionais oncogênicas e em outros distúrbios de expressão gênica, tornando o MED6 um ponto útil para estudos mecanísticos do controle transcricional.

Med6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MED6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Med6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MED6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MED6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Med6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MED6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Med6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Med6 em células tumorais com expressão de MED6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.