Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
MECL-1 Double Nickase Plasmid (h2): sc-402101-NIC-2
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MECL-1 Double Nickase Plasmid (h2) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MECL-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) und MECL-1 Double-Nickase-Plasmid (h22) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PSMB10 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MECL-1: sc-133236
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MECL-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402101-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane PSMB10-Gen kodiert die Proteasom-Untereinheit Beta Typ 10 (MECL-1), eine induzierbare katalytische Komponente des Immunoproteasoms, die bei entzündlicher Signalgebung konstitutive β-Untereinheiten ersetzt und so die proteolytischen Spaltpräferenzen neu ausrichtet. MECL-1 unterstützt den ubiquitin–proteasomvermittelten Proteinumsatz und verbessert die Antigenprozessierung für MHC-Klasse-I, wodurch interferongetriebene Antworten mit der adaptiven Immunüberwachung verknüpft und NF-κB-assoziierte Proteostase-Programme moduliert werden. Eine Dysregulation der Zusammensetzung oder Aktivität des Immunoproteasoms wird mit veränderter Antigenpräsentation und chronischer Immunaktivierung in Kontexten wie Autoimmunität, Infektion und tumorvermittelter Immunflucht in Verbindung gebracht. Das gezielte Editieren von PSMB10 ermöglicht die mechanistische Untersuchung immunoproteasomabhängiger Peptidrepertoires, der Kontrolle der Proteomqualität unter Zytokinstress sowie der Umverdrahtung von Immun-Signalwegen in humanen Zellmodellen.
MECL-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h2) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PSMB10-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PSMB10 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PSMB10-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PSMB10-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.