MCP-5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422836

Descripción general

El gen murino Ccl12 codifica la proteína quimioatrayente de monocitos 5 (MCP-5), una quimiocina CC que promueve la quimiotaxis de monocitos/macrófagos y de otros subgrupos de leucocitos durante las respuestas inflamatorias. MCP-5 señaliza principalmente a través de receptores de quimiocinas como CCR2 para activar vías mediadas por GPCR que remodelan el citoesqueleto y coordinan la migración dirigida, integrándose con redes más amplias de señalización de citocinas y de la inmunidad innata. Estudios in vivo e in vitro vinculan la actividad de Ccl12/MCP-5 con programas de infiltración leucocitaria en el daño tisular y la inflamación crónica, con relevancia para la fibrosis, la inflamación metabólica y el reclutamiento mieloide asociado a tumores. Como quimiocina secretada, MCP-5 también sirve como un indicador medible y práctico de la comunicación cruzada entre células inmunitarias y de las interacciones estroma–inmunidad en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MCP-5 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ccl12 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ccl12 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ccl12 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MCP-5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ccl12 para la investigación de la señalización de MCP-5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ccl12 críticos para la función de MCP-5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ccl12 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MCP-5 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MCP-5 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ccl12. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MCP-5 (m) y el plásmido HDR MCP-5 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ccl12 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ccl12 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.