Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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MCH-1R Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402512
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MCH-1R Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico MCH-1R, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MCH-1R Antibody (52-W7): sc-100327
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MCH-1R Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402512 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
MCHR1 codifica il recettore 1 dell’ormone concentrante la melanina (MCH-1R), un GPCR di classe A che lega il neuropeptide MCH e regola la segnalazione neuronale coinvolta nell’omeostasi energetica, nel comportamento alimentare, nello stato di veglia/arousal e nei processi legati all’umore. Una volta attivato, MCH-1R si accoppia principalmente alle vie Gi/o e Gq per modulare il cAMP intracellulare, la segnalazione della fosfolipasi C, i flussi di calcio e le cascate di chinasi a valle come ERK/MAPK. L’attività del recettore influenza la trasmissione sinaptica e le risposte neuroendocrine nei circuiti ipotalamici e limbici. La disregolazione della segnalazione di MCHR1 è stata associata a fenotipi metabolici, tra cui obesità e insulino-resistenza, oltre a caratteristiche neuropsichiatriche rilevanti per la ricerca su ansia e depressione.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MCH-1R (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MCHR1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MCHR1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MCHR1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MCH-1R.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MCHR1 per lo studio della segnalazione di MCH-1R, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni MCHR1 critici per la funzione di MCH-1R
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MCHR1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal MCH-1R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MCH-1R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MCHR1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal MCH-1R Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MCH-1R (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MCHR1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MCHR1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.