MCAT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404338

概要

MCAT（マロニルCoA:ACPトランスアシラーゼ）はミトコンドリアに存在する酵素で、マロニル基をアシルキャリアタンパク質（ACP）へ転移することにより、ミトコンドリア脂肪酸合成（mtFAS）に必須の役割を担います。これによりリポ酸産生に用いられるアシル鎖の伸長が可能になります。MCATはリポ酸生成を介して、ピルビン酸デヒドロゲナーゼやα-ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼなどの主要な脱水素酵素複合体のリポイル化を支え、mtFASを中心炭素代謝、酸化還元恒常性、ならびにミトコンドリアのエネルギーフラックスと結び付けます。MCAT活性が撹乱されると、ミトコンドリア呼吸や代謝物利用に影響が及び、その下流で酸化ストレスや代謝リプログラミングに変化が生じ得ます。これらの過程は、ミトコンドリア機能不全や代謝関連疾患の生物学的機序を検討する研究に関連し、特にリポイル化状態やTCA回路に連結した酵素機能が変化する状況で重要です。

MCAT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMCAT遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MCAT内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MCATのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MCATタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MCATシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MCAT欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MCATの機能に不可欠なMCATエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MCATゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MCAT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMCAT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MCAT遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MCAT HDRプラスミド（h）および MCAT HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMCATホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMCAT標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。