MATH-1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404171-LAC

ATOH1 (MATH-1) codifica un fattore di trascrizione basic helix–loop–helix che orchestra i programmi di impegno di linea e differenziamento durante lo sviluppo umano. MATH-1 regola reti geniche che controllano la neurogenesi e le decisioni di destino delle cellule epiteliali, integrandosi con l’inibizione laterale dipendente da Notch, la segnalazione Wnt/β-catenina e il rimodellamento della cromatina per determinare l’esito delle cellule progenitrici. Un’espressione o un’attività deregolata di ATOH1 è stata associata a stati di differenziamento alterati e a proliferazione aberrante in molteplici contesti tissutali, a supporto del suo impiego come punto di ingresso molecolare per lo studio di circuiti trascrizionali ancorati allo sviluppo. In quanto nodo in vie che determinano il destino cellulare, ATOH1 è frequentemente analizzato in modelli di specificazione delle linee neurali e sensoriali, omeostasi epiteliale e riprogrammazione dell’identità cellulare guidata da fattori di trascrizione.

Le particelle di attivazione lentivirale MATH-1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ATOH1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale MATH-1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ATOH1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di MATH-1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ATOH1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.