MATH-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419230

Übersicht

Atoh1 (MATH-1) ist ein Transkriptionsfaktor der basischen Helix-Loop-Helix-(bHLH)-Familie, der während der Mausentwicklung als linienbestimmender Regulator wirkt und Programme der neuronalen und sensorischen Zelldifferenzierung antreibt. Er integriert vorgeschaltete Morphogen- und Signalhinweise, darunter Notch-vermittelte laterale Inhibition und Wnt-assoziierte Musterbildungssignale, um die Festlegung des Zellschicksals und die Reifung zu koordinieren. Die Atoh1-Aktivität ist entscheidend für die Spezifikation und den Erhalt mechanosensorischer Haarzellen sowie mehrerer neuronaler Vorläuferpopulationen und verknüpft ihn mit Signalwegen, die den Übergang von Proliferation zu Differenzierung steuern. Eine dysregulierte Atoh1-Expression oder -Funktion wurde mit veränderten neurodevelopmentalen Entwicklungsverläufen und aberranten Differenzierungszuständen in Verbindung gebracht, die für Krankheitsmodelle in Geweben relevant sind, in denen Atoh1 die Kompetenz von Vorläuferzellen bestimmt.

Das MATH-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Atoh1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Atoh1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Atoh1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MATH-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Atoh1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MATH-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Atoh1-Exone abzielen, die für die MATH-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Atoh1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MATH-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom MATH-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Atoh1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MATH-1 HDR-Plasmid (m) und MATH-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Atoh1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Atoh1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.