MARCKS Double Nickaseプラスミド (h): sc-400837-NIC

ミリストイル化アラニンリッチCキナーゼ基質（MARCKS）は、膜に局在しPKC（プロテインキナーゼC）によって制御されるアクチン結合タンパク質で、可逆的なリン酸化およびカルモジュリン結合を介して、細胞骨格リモデリング、膜輸送、ホスホイノシチドシグナル伝達を協調的に制御します。MARCKSは形質膜でPIP2を隔離・放出することで、細胞極性、運動性、エンドサイトーシス、エキソサイトーシスを制御する経路に影響し、MAPKやRhoファミリーGTPアーゼに連動するプロセスにも下流効果を及ぼします。MARCKSの機能は、神経発生やシナプス可塑性に加え、免疫細胞の活性化および分泌の文脈で頻繁に研究されています。MARCKSの発現やリン酸化の異常は、がんモデルにおける遊走・浸潤表現型の変化や、炎症性疾患および神経発達疾患の機序と関連付けられており、シグナル伝達ネットワークにおける機能的ハブとしての重要性を示しています。

MARCKS ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MARCKS 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MARCKS内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MARCKSの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MARCKSが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。