MAP-1S Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406495

Panoramica

MAP1S codifica la proteina associata ai microtubuli 1S (MAP-1S), un adattatore citoscheletrico che collega i microtubuli alla macchina dell’autofagia e influenza il traffico intracellulare, la dinamica degli organelli e le risposte cellulari allo stress. MAP-1S è stata implicata nella regolazione della formazione degli autofagosomi e nella gestione del carico, collegando la stabilità dei microtubuli alla proteostasi e al controllo di qualità mitocondriale. Attraverso questi processi, MAP1S contribuisce alle risposte omeostatiche allo stress ossidativo e alle perturbazioni metaboliche, vie frequentemente alterate nel cancro e nella neurodegenerazione. Alterazioni dell’espressione o della funzione di MAP1S sono state associate a un’autofagia deregolata e a fenotipi di instabilità genomica rilevanti per la biologia tumorale e per altre patologie legate allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MAP-1S (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MAP1S in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MAP1S insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MAP1S a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MAP-1S.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MAP1S per lo studio della segnalazione di MAP-1S, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MAP1S critici per la funzione di MAP-1S
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MAP1S per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MAP-1S CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MAP-1S CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MAP1S. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MAP-1S Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MAP-1S (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MAP1S per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MAP1S definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.