Plasmide Double Nickase (h) MAGE-A1: sc-401056-NIC

MAGEA1 code pour MAGE‑A1, un antigène cancer‑testis normalement limité aux tissus germinaux immunologiquement privilégiés, mais exprimé de façon aberrante dans de nombreux types de tumeurs, ce qui en fait un marqueur largement utilisé des programmes transcriptionnels associés aux tumeurs. MAGE‑A1 peut interagir avec des ligases E3 de l’ubiquitine et des composants apparentés du contrôle qualité des protéines, ce qui le relie à la régulation de la stabilité protéique, aux réponses au stress et au contrôle contextuel de la signalisation cellulaire. Son expression est influencée par des mécanismes épigénétiques tels que la méthylation de l’ADN et le remodelage de la chromatine, reliant MAGEA1 à des voies impliquées dans la répression et la dérépression transcriptionnelles. En recherche, MAGEA1 est étudié pour ses rôles dans la présentation d’antigènes et la reconnaissance immunitaire, la plasticité des cellules tumorales, et la manière dont une dérégulation épigénétique permet une expression génique inappropriée au regard de la lignée cellulaire.

MAGE-A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MAGEA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MAGEA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MAGEA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MAGEA1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.