Plásmido CRISPR de Activación (h) MAG: sc-401604-ACT

La glicoproteína asociada a la mielina (MAG) es un miembro de la superfamilia de inmunoglobulinas, de tipo I y transmembrana, enriquecido en oligodendrocitos y células de Schwann, donde media la adhesión axón–glía y favorece la estabilidad de la mielina. Mediante el reconocimiento de gangliósidos sialilados y otros glicoconjugados neuronales relacionados, MAG influye en el crecimiento de neuritas, el mantenimiento del calibre axonal y la integridad a largo plazo de las fibras mielinizadas. MAG participa en vías que regulan las interacciones mielina–axón y la inhibición del crecimiento axonal tras una lesión, vinculando su actividad con mecanismos de plasticidad y reparación neural. La alteración de la expresión de MAG o la reactividad inmunitaria frente a MAG se ha asociado con contextos desmielinizantes y neurodegenerativos, lo que la convierte en un objetivo relevante para el estudio de la biología de la sustancia blanca.

MAG El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAG sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MAG El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAG en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MAG. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAG y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MAG en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MAG en células tumorales con expresión de MAG silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.