MafB CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400554-ACT

MAFB kodiert MafB, einen großen Maf-bZIP-Transkriptionsfaktor, der an Maf-Erkennungselemente bindet und so linienspezifische Transkriptionsprogramme steuert. In menschlichen Geweben ist es ein zentraler Regulator der myeloischen und Makrophagen-Differenzierung, der Modulation der Expression entzündungsrelevanter Gene sowie der Aufrechterhaltung spezialisierter Zellzustände, darunter die Identität renaler Podozyten und die Funktion pankreatischer Inselzellen. MafB integriert Signale aus Entwicklungs- und stressantwortenden Signalwegen, um terminale Differenzierung, zelluläre Reifung und Gewebehomöostase zu koordinieren. Eine dysregulierte MAFB-Expression oder -Aktivität wurde mit Immun- und Entzündungsphänotypen, glomerulärer Nierenfunktionsstörung und veränderten zellulären Differenzierungsprogrammen in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie relevant sind.

MafB Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MAFB-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MafB Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MAFB-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MAFB-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MafB-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MAFB-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MafB-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MafB-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MAFB-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.