MAdCAM-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403616-ACT

MADCAM1 codifica la mucosal addressin cell adhesion molecule 1 (MAdCAM-1), una glicoproteina endoteliale che media il reclutamento selettivo e la ritenzione dei linfociti circolanti all’interno dei tessuti mucosali. Interagendo con l’integrina α4β7 sui linfociti, MAdCAM-1 favorisce l’adesione e la transmigrazione attraverso venule specializzate e contribuisce all’organizzazione delle strutture linfoidi associate all’intestino. La sua espressione è regolata dalla segnalazione di citochine infiammatorie e si integra con i programmi di attivazione endoteliale che coordinano il traffico leucocitario e la sorveglianza immunitaria locale. Un’attività deregolata di MAdCAM-1 è stata associata a infiammazione mucosale cronica e a patologie immunomediate, rendendola un marcatore utile e un nodo meccanicistico per lo studio del rimodellamento tissutale guidato dall’infiammazione.

MAdCAM-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MADCAM1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MAdCAM-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MADCAM1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MADCAM1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MAdCAM-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MADCAM1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MAdCAM-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MAdCAM-1 nelle cellule tumorali con espressione di MADCAM1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.