Plasmide CRISPR/Cas9 KO mAChR M5 (h): sc-402943

Présentation

CHRM5 code le récepteur muscarinique de l’acétylcholine M5 (mAChR M5), un récepteur couplé aux protéines G qui s’associe principalement à Gq/11 pour activer la signalisation via la phospholipase C, la production de phosphates d’inositol, la mobilisation du Ca2+ intracellulaire et des voies dépendantes de la PKC. Par l’intermédiaire de ces cascades de seconds messagers, le mAChR M5 module l’excitabilité neuronale, la transmission synaptique et le tonus vasculaire, et peut également activer la signalisation MAPK/ERK, avec des effets en aval sur les programmes d’expression génique. CHRM5 est exprimé dans des populations cellulaires distinctes, neuronales et périphériques, où la régulation cholinergique s’entrecroise avec les circuits dopaminergiques et la régulation neurovasculaire. Une signalisation muscarinique dérégulée a été impliquée dans des phénotypes neuropsychiatriques et neurologiques, ce qui étaye l’utilisation de modèles de perturbation de CHRM5 pour disséquer la contribution des voies cholinergiques à des processus cellulaires pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO mAChR M5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CHRM5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CHRM5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CHRM5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine mAChR M5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CHRM5 pour l'étude de la signalisation de mAChR M5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CHRM5 essentiels à la fonction de mAChR M5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CHRM5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le mAChR M5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le mAChR M5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CHRM5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le mAChR M5 plasmide HDR (h) et le mAChR M5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CHRM5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CHRM5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.