mAChR M2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402394

概要

CHRM2はムスカリン性アセチルコリン受容体のM2サブタイプ（mAChR M2）をコードしており、Gi/o共役型GPCRとしてアデニリルシクラーゼ活性を抑制することで細胞内cAMP量および下流のPKAシグナル伝達を低下させます。mAChR M2はまた、イオンチャネルのコンダクタンスを調節し、神経回路における膜興奮性や神経伝達物質放出に影響を与えるほか、心筋細胞における変時性・変力性応答も制御します。これらの機構を通じて、CHRM2はコリン作動性神経伝達、自律神経系の制御、さらに広範なGPCR依存性シグナル伝達ネットワークに関与します。ムスカリン受容体シグナルの異常は、研究レベルでは心臓電気生理学的表現型や神経精神・認知過程との関連が示されており、CHRM2は経路解析のための有用な結節点となります。

mAChR M2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCHRM2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CHRM2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CHRM2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、mAChR M2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、mAChR M2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CHRM2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• mAChR M2の機能に不可欠なCHRM2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CHRM2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• mAChR M2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびmAChR M2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CHRM2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  mAChR M2 HDRプラスミド（h）および mAChR M2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCHRM2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCHRM2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。