LTRPC7 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402820-NIC

TRPM7 (LTRPC7) codifica um canal iônico–quinase bifuncional que medeia o influxo de Mg2+ e Ca2+, ao mesmo tempo em que acopla a homeostase de cátions divalentes à fosforilação em serina/treonina. A atividade de TRPM7 influencia a dinâmica do citoesqueleto, a adesão e a migração celular e a excitabilidade de membrana por meio de vias ligadas à sinalização por fosfoinositídeos, à mecanotransdução e à regulação, dependente de quinase, de efetores a jusante. Como regulador central do equilíbrio intracelular de magnésio e cálcio, TRPM7 tem sido estudado no contexto de proliferação, respostas ao estresse e adaptação metabólica. Alterações na função ou na expressão de TRPM7 têm sido associadas a mecanismos de lesão neurológica, remodelamento cardiovascular e estados de sinalização relevantes para o câncer, sustentando sua utilidade como alvo de pesquisa em múltiplos modelos de doença.

LTRPC7 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus TRPM7 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de TRPM7. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função TRPM7. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com TRPM7 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.