LRF/Pokemon CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421462

Übersicht

Zbtb7a kodiert LRF/Pokemon, einen BTB/POZ-Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der über sequenzspezifische DNA-Bindung und die Rekrutierung von Korepressor-Komplexen die Linienfestlegung, Proliferation und das Überleben von Zellen reguliert. In hämatopoetischen und immunologischen Kontexten trägt es zur Koordination der Entwicklungsprogramme von B- und T-Zellen bei, beeinflusst die erythroide Reifung und moduliert differenzierungsassoziierte transkriptionelle Netzwerke. LRF/Pokemon greift in Signalwege ein, die Zellzyklus-Checkpoints und Stressantworten steuern, einschließlich einer funktionellen Antagonisierung der ARF–p53-Tumorsuppressor-Signalkaskade, und kann Chromatinzustände an Ziel-Loci umformen. Eine veränderte Zbtb7a-Aktivität wird mit onkogenen Transkriptionsprogrammen und abnormen Differenzierungsphänotypen in Modellen hämatologischer und solider Malignome in Verbindung gebracht und stellt damit einen relevanten Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Tumorentstehung und zur Kontrolle des Zellschicksals dar.

Das LRF/Pokemon CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Zbtb7a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Zbtb7a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Zbtb7a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LRF/Pokemon-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Zbtb7a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LRF/Pokemon-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Zbtb7a-Exone abzielen, die für die LRF/Pokemon-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Zbtb7a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LRF/Pokemon CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom LRF/Pokemon CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Zbtb7a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LRF/Pokemon HDR-Plasmid (m) und LRF/Pokemon HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Zbtb7a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Zbtb7a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.