LPL CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400751-ACT

ヒトLPL（リポタンパク質リパーゼ）遺伝子は分泌型のトリグリセリド加水分解酵素をコードしており、毛細血管内皮細胞の管腔側表面に存在するヘパラン硫酸プロテオグリカンに係留されます。LPLは、カイロミクロンおよびVLDL中のトリグリセリドを加水分解して遊離脂肪酸を放出し、組織への取り込みを可能にします。LPL活性は、脂肪組織・骨格筋・心臓にまたがる脂質の分配を調整し、アポリポタンパク質や内皮輸送因子が関与するリポタンパク質リモデリング過程とも統合的に連携します。循環中トリグリセリドのクリアランスと脂質フラックスを制御することで、LPLは代謝恒常性の中枢を担い、エネルギーバランス、インスリン感受性、炎症性脂質シグナル伝達を制御する経路とも交差します。LPLの発現や機能の変化は脂質異常症の表現型や心代謝疾患の病態と関連しており、脂質代謝および血管系の機構研究を支える要素となっています。

LPL CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LPLの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LPL CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LPL 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLPL転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LPLの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLPL遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLPL依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLPL発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLPL経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。