LMTK3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403191-ACT

A quinase 3 de tirosina do lêmure humano (LMTK3) codifica uma quinase Ser/Thr associada à membrana, implicada na regulação do tráfego de receptores e da transdução de sinal, incluindo a modulação de vias de receptores de fatores de crescimento e de hormônios. A LMTK3 influencia a proliferação celular, a sobrevivência e programas transcricionais por meio do controle, dependente de quinase, da triagem endossomal e de redes de sinalização a jusante. A expressão desregulada de LMTK3 foi relatada em múltiplos contextos tumorais e é frequentemente estudada por seu papel na sinalização oncogênica, na responsividade endócrina e em mecanismos de resistência a terapias. Como resultado, a LMTK3 é um alvo útil para dissecar a comunicação cruzada entre vias dependentes de quinases, o turnover de receptores e a regulação transcricional dependente de contexto em modelos de células humanas.

LMTK3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LMTK3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LMTK3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LMTK3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LMTK3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LMTK3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LMTK3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LMTK3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LMTK3 em células tumorais com expressão de LMTK3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.