Plásmido Doble Nickase (h) LMP2: sc-401615-NIC

PSMB9 codifica la subunidad catalítica del inmunoproteasoma humano LMP2 (β1i), que reemplaza a la subunidad constitutiva β1 en respuesta al interferón‑γ y a otras señales inflamatorias. LMP2 contribuye a la proteólisis dependiente de ubiquitina y modula el repertorio de péptidos generado para el procesamiento y la presentación de antígenos por MHC de clase I, influyendo así en el reconocimiento por células T CD8+. A través de su papel en el ensamblaje del inmunoproteasoma y en las preferencias de corte proteasomal, PSMB9 conecta la señalización inflamatoria innata con la vigilancia inmunitaria adaptativa y la homeostasis de proteínas celulares. Se ha asociado la actividad o expresión alteradas de PSMB9 con una presentación antigénica desregulada y con fenotipos inflamatorios relevantes para la autoinmunidad, la biología de las infecciones y las interacciones inmunitarias en tumores.

LMP2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PSMB9 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PSMB9. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PSMB9. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PSMB9 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.