LHX2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401071-ACT

LHX2（LIM homeobox 2）は、LIMドメインとホメオドメインを含む核内転写因子で、発生や組織パターニングの過程における細胞運命決定を制御します。ヒト細胞では、LHX2は増殖、分化、前駆細胞様状態の維持を担う転写プログラムに寄与し、クロマチン構造や系譜決定性遺伝子ネットワークにも下流効果を及ぼします。その活性は、神経系や上皮系を含む器官形成を形作る発生シグナル伝達および転写制御回路と交差します。LHX2の発現異常は複数の疾患関連発現シグネチャーで報告されており、異常分化や転写制御の機構を研究するうえで有用な結節点となります。

LHX2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LHX2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

LHX2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LHX2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLHX2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性LHX2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLHX2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLHX2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLHX2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLHX2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。