Plásmido CRISPR de Activación (m) LHPP: sc-429326-ACT

El gen Lhpp del ratón codifica LHPP, una fosfatasa dependiente de histidina que hidroliza residuos de fosfohistidina en sustratos proteicos, contribuyendo a la regulación de la señalización mediada por fosfohistidina. Al modular el control de la actividad enzimática y del flujo metabólico dependiente de la fosforilación, LHPP se vincula con la bioenergética celular y con procesos sensibles a los nutrientes. La alteración de la expresión o la actividad de LHPP se ha asociado con una regulación anómala del control del crecimiento y con la reprogramación metabólica en contextos relevantes para la enfermedad, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar el acoplamiento entre señalización y metabolismo. Por ello, Lhpp se investiga con frecuencia en modelos que exploran la dinámica de la fosforilación, la adaptación al estrés y las vías que influyen en la proliferación y la diferenciación.

LHPP El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Lhpp sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LHPP El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Lhpp en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Lhpp, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LHPP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Lhpp y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LHPP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LHPP en células tumorales con expresión de Lhpp silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.