LAP2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423428

Descripción general

Tmpo codifica la proteína 2 asociada a la lámina (LAP2), una proteína de la membrana nuclear interna que se une a las láminas y a la cromatina para sostener la arquitectura de la envoltura nuclear y la organización del genoma en células de ratón. Las isoformas de LAP2 contribuyen al ensamblaje nuclear tras la mitosis, a la regulación del anclaje de la cromatina y a la coordinación de la replicación del ADN y de programas transcripcionales vinculados a la progresión del ciclo celular. Mediante interacciones con la lámina nuclear y con el factor de barrera contra la autointegración (BAF), LAP2 ayuda a regular la mecanotransducción, la estabilidad nuclear y el control espacial de la expresión génica. La desregulación de componentes de la envoltura nuclear y de vías asociadas a la lámina es ampliamente relevante en modelos de laminopatías, inestabilidad genómica y estados de diferenciación alterados en contextos del desarrollo y de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LAP2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tmpo en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tmpo junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tmpo tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LAP2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tmpo para la investigación de la señalización de LAP2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tmpo críticos para la función de LAP2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tmpo para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LAP2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido LAP2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tmpo. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LAP2 (m) y el plásmido HDR LAP2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tmpo para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tmpo definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.