LAMP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400120-ACT

A glicoproteína 1 associada à membrana lisossomal (LAMP1) é uma proteína transmembrana do tipo I, altamente abundante, presente na membrana limitante do lisossomo, que ajuda a manter a integridade dos lisossomos e sustenta a dinâmica de fusão de vesículas. Ela participa do tráfego endo-lisossomal, da lisofagia e do fluxo autofágico, influenciando vias de degradação e reciclagem de cargas que se intersectam com a sinalização de mTOR e com respostas ao estresse. O posicionamento dos lisossomos e a estabilidade de membrana mediados por LAMP1 também modulam a exocitose e o processamento de antígenos em células imunes, conectando a biologia lisossomal à sinalização inflamatória. A expressão desregulada de LAMP1 e a disfunção lisossomal estão associadas à neurodegeneração, a interações hospedeiro–patógeno relacionadas a infecções e à adaptação de células cancerosas ao estresse metabólico, tornando-a um nó útil para investigações em nível de vias.

LAMP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LAMP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LAMP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LAMP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LAMP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LAMP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LAMP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LAMP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LAMP1 em células tumorais com expressão de LAMP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.