Particules Lentivirales d'Activation (h) Laminin γ-2: sc-401068-LAC

LAMC2 code la chaîne γ2 de la laminine, un composant clé de la laminine-332 des membranes basales, qui soutient l’adhérence épithéliale, la polarité et l’intégrité tissulaire. Par ses interactions avec des intégrines telles que α3β1 et α6β4, la laminine γ2 contribue à la signalisation des adhérences focales, à l’organisation des hémidesmosomes et à des voies en aval, notamment FAK/Src, PI3K–AKT et MAPK, qui régulent la migration et la survie. Le clivage protéolytique de la laminine-332 peut générer des fragments favorisant la motilité, reliant ainsi LAMC2 au remodelage dynamique de la matrice extracellulaire lors de la réparation des plaies. Une expression dérégulée de LAMC2 et un assemblage altéré de la laminine-332 sont fréquemment étudiés dans les défauts de barrière épithéliale et les programmes d’invasion associés aux tumeurs, en tant que biomarqueurs de la perturbation de la membrane basale.

Les particules d'activation lentivirales Laminin γ-2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de LAMC2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Laminin γ-2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription LAMC2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Laminin γ-2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif LAMC2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.