Plásmido Doble Nickase (h) Laminin β-3: sc-402636-NIC

LAMB3 codifica la laminina β-3, una subunidad esencial de la laminina-332 (α3β3γ2), una glucoproteína de la membrana basal que organiza la arquitectura de la matriz extracelular y promueve la adhesión, la polaridad y la migración epiteliales. Mediante interacciones con integrinas como α3β1 y α6β4, la laminina-332 favorece el ensamblaje de hemidesmosomas y modula vías de señalización de las adhesiones focales que influyen en la dinámica del citoesqueleto y la integridad tisular. Las señales de la matriz dependientes de LAMB3 son fundamentales para la función de barrera epidérmica y mucosa, y la expresión u organización alteradas de la laminina-332 se han asociado con trastornos de fragilidad cutánea y con comportamiento invasivo en tumores epiteliales. Estas características hacen de LAMB3 una diana ampliamente utilizada para estudiar la biología de la membrana basal, la señalización célula–matriz y la remodelación epitelial.

Laminin β-3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LAMB3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LAMB3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LAMB3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LAMB3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.