Laminin β-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401105-ACT

LAMB1 codifica a laminina β1, uma subunidade central de múltiplos heterotrímeros de laminina que constituem um importante componente estrutural e de sinalização das membranas basais. A laminina β1 sustenta a montagem da matriz extracelular, a adesão celular, a polaridade e a migração por meio de interações com integrinas e outros recetores da matriz, influenciando vias como a sinalização de adesões focais e a remodelação do citoesqueleto. Ao moldar a integridade da membrana basal e a comunicação célula–matriz, a laminina β1 contribui para a arquitetura dos tecidos em compartimentos epiteliais, vasculares e do sistema nervoso. A expressão desregulada de LAMB1 ou a organização da membrana basal é frequentemente estudada no contexto de defeitos do desenvolvimento, da biologia da invasão tumoral e metástase, e de microambientes fibróticos ou inflamatórios.

Laminin β-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LAMB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Laminin β-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LAMB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LAMB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Laminin β-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LAMB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Laminin β-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Laminin β-1 em células tumorais com expressão de LAMB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.