KV6.3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-413962

Descripción general

KCNG4 codifica la subunidad Kv6.3, un miembro eléctricamente silencioso de la familia de canales de potasio dependientes de voltaje que modula la excitabilidad de la membrana al formar heterotetrámeros con subunidades α de canales Kv2. A través de esta función moduladora, Kv6.3 influye en la forma del potencial de acción, los umbrales de disparo y la cinética de repolarización, integrándose en la homeostasis iónica y en procesos de señalización asociados a la excitabilidad. Se ha descrito la expresión de KCNG4 en tejidos excitables y es relevante para vías que regulan la señalización neuronal y sensorial, así como el comportamiento eléctrico del músculo liso. La desregulación de moduladores de canales de potasio se ha implicado de manera amplia en trastornos de la excitabilidad, lo que respalda a KCNG4 como diana para estudios mecanísticos sobre la composición y la función de los canales iónicos en modelos celulares relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO KV6.3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KCNG4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KCNG4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KCNG4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína KV6.3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KCNG4 para la investigación de la señalización de KV6.3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KCNG4 críticos para la función de KV6.3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KCNG4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido KV6.3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido KV6.3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KCNG4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR KV6.3 (h) y el plásmido HDR KV6.3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KCNG4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KCNG4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.