KLK12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407376

Übersicht

KLK12 kodiert die Kallikrein-verwandte Peptidase 12, eine sekretierte Serinprotease, die zum Umbau der extrazellulären Matrix und zur perizellulären Proteolyse beiträgt. Durch die Prozessierung peptidischer Substrate und die Beeinflussung von Proteasekaskaden kann KLK12 Zell–Matrix-Interaktionen, die Gewebehomöostase sowie Signalereignisse modulieren, die mit Migration und angiogenen Antworten verknüpft sind. Eine veränderte KLK12-Expression wurde bei mehreren menschlichen Pathologien beschrieben, darunter Krebserkrankungen, bei denen Verschiebungen im proteolytischen Gleichgewicht invasionsassoziierte Prozesse im Mikromilieu beeinflussen können. Als lösliche Protease mit kontextabhängiger Aktivität wird KLK12 häufig in Modellen der Tumorbiologie, der vaskulären Regulation und des entzündungsbedingten Gewebeumbaus untersucht.

Das KLK12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des KLK12-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des KLK12-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von KLK12 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KLK12-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von KLK12-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KLK12-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf KLK12-Exone abzielen, die für die KLK12-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere KLK12-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KLK12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KLK12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des KLK12-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KLK12 HDR-Plasmid (h) und KLK12 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von KLK12-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten KLK12-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.