KIR6.1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401477

Panoramica

KCNJ8 codifica la subunità del canale del potassio a rettificazione entrante KIR6.1 (Kir6.1), un componente fondamentale dei canali del potassio sensibili all’ATP (KATP), che collegano lo stato metabolico cellulare all’eccitabilità di membrana. In molti tessuti, Kir6.1 si associa alle subunità del recettore delle sulfoniluree per regolare il flusso di potassio in risposta alle variazioni del rapporto ATP/ADP, influenzando il tono della muscolatura liscia vascolare, le risposte allo stress cellulare e la segnalazione dipendente dall’eccitabilità. Collegando il rilevamento dei nucleotidi alla conduzione ionica, KIR6.1 contribuisce a processi quali la stabilizzazione del potenziale di membrana, la gestione del calcio e l’omeostasi bioenergetica. Alterazioni genetiche e funzionali di KCNJ8 sono state associate a canalopatie e fenotipi cardiovascolari, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici in cellule eccitabili e in contesti di segnalazione metabolica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR6.1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KCNJ8 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KCNJ8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KCNJ8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KIR6.1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KCNJ8 per lo studio della segnalazione di KIR6.1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KCNJ8 critici per la funzione di KIR6.1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KCNJ8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KIR6.1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KIR6.1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KCNJ8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KIR6.1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KIR6.1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KCNJ8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KCNJ8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.