KIBRA Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-402677-LAC

WWC1 codifica a KIBRA, uma proteína de ancoragem (scaffold) enriquecida no cérebro e no rim, que integra a sinalização da via Hippo com a organização do citoesqueleto, a polaridade celular e o tráfego de membranas. A KIBRA interage com componentes centrais da via Hippo e com reguladores de polaridade para modular programas transcricionais dependentes de YAP/TAZ, que influenciam proliferação, diferenciação e homeostase tecidual. Ela também contribui para a função sináptica e para a sinalização relacionada à memória por meio da coordenação do tráfego de receptores e da dinâmica de actina. Alterações na regulação de WWC1/KIBRA têm sido associadas a fenótipos neurocognitivos e a desregulação do controle de crescimento em contextos celulares relevantes para doenças, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos focados em vias de sinalização.

As Partículas de Ativação Lentivirais KIBRA (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de WWC1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais KIBRA (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição WWC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de KIBRA. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo WWC1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.