KHS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405817

Übersicht

Mitogen-aktivierte Proteinkinase-Kinase-Kinase-Kinase 5 (MAP4K5), auch bekannt als „kinase homologous to SPS1/STE20“ (KHS), ist eine Serin/Threonin-Kinase der Ste20-Familie, die stromaufwärts von MAPK-Signalmodulen wirkt. MAP4K5 trägt zur stressabhängigen und entzündlichen Signalübertragung bei, indem sie JNK und verwandte Signalwege reguliert, und beeinflusst dadurch Transkriptionsprogramme, die Proliferation, Apoptose und die Zytoskelettdynamik steuern. In menschlichen Zellen wurde die KHS-Aktivität mit der Modulation angeborener Immunantworten und metabolischer Signalwege in Verbindung gebracht, wodurch MAP4K5 in umfassendere Netzwerke eingebettet ist, die rezeptorvermittelte Signale mit Kinasekaskaden integrieren. Eine fehlregulierte MAP4K5-Signalgebung wurde in Kontexten wie der Umverdrahtung onkogener Signalwege und Mechanismen entzündlicher Erkrankungen untersucht, was ihre Eignung als Knotenpunkt für die Analyse von Signalwegen unterstützt.

Das KHS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MAP4K5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MAP4K5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MAP4K5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KHS-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MAP4K5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KHS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MAP4K5-Exone abzielen, die für die KHS-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MAP4K5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KHS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom KHS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MAP4K5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KHS HDR-Plasmid (h) und KHS HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MAP4K5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MAP4K5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.