Keratin 81 Plasmide Double Nickase (h): sc-405797-NIC

KRT81 codifica la cheratina 81, una cheratina dei capelli di tipo II che si assembla con le cheratine di tipo I per formare filamenti intermedi, fornendo resistenza alla trazione e organizzazione strutturale nell’epitelio differenziato del follicolo pilifero. La cheratina 81 contribuisce all’integrità del citoscheletro, alla meccanica cellulare e all’architettura delle strutture cheratinizzate attraverso un’assemblaggio regolato dei filamenti, la reticolazione e un’espressione dipendente dallo stato di differenziamento. La sua funzione è integrata con i programmi di differenziamento epiteliale e con la segnalazione di risposta allo stress, che influenzano la dinamica dei filamenti e la resilienza dei tessuti. Alterazioni della sequenza o dell’espressione di KRT81 sono associate a fenotipi di fragilità del fusto del capello e a disturbi correlati della formazione della fibra capillare, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio della biologia delle reti di cheratine.

Keratin 81 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KRT81 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KRT81. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KRT81. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KRT81 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.