Keap1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400190-LAC

Il gene umano **KEAP1** codifica Keap1, un adattatore di substrato per il complesso di ligasi ubiquitina E3 **CUL3–RBX1**, che controlla il turnover proteasomiale di **NRF2 (NFE2L2)** e, di conseguenza, modula finemente le risposte allo stress antiossidante e agli xenobiotici. Rilevando elettrofili e specie reattive dell’ossigeno tramite domini ricchi di cisteina, Keap1 regola l’accumulo nucleare di NRF2 e la trascrizione di geni citoprotettivi coinvolti nel metabolismo del glutatione, nella rigenerazione di NADPH e nella detossificazione di fase II. Questo asse **KEAP1–NRF2** integra l’omeostasi redox con il rimodellamento metabolico, la segnalazione infiammatoria e l’autofagia attraverso interazioni con proteine come **p62/SQSTM1**. La disregolazione del controllo di NRF2 dipendente da KEAP1 è spesso studiata in contesti di biologia dello stress ossidativo, inclusi la carcinogenesi, fenotipi associati alla chemioresistenza e modelli di danno tissutale cronico.

Le particelle di attivazione lentivirale Keap1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di KEAP1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Keap1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione KEAP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Keap1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo KEAP1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.