KDEL receptor 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430617

Übersicht

Kdelr3 kodiert den KDEL-Rezeptor 3, einen im Golgi-Apparat lokalisierten Rückholrezeptor, der das C‑terminale KDEL-Motiv entwichener luminaler ER-Chaperone erkennt und sie über COPI-abhängigen retrograden Transport vom Golgi zurück in das endoplasmatische Retikulum befördert. Durch die Aufrechterhaltung der ER-Proteostase und der Calciumhomöostase beeinflusst KDELR3 die Signalgebung der Unfolded-Protein-Response, die Integrität des sekretorischen Weges sowie das stressadaptive Remodeling des frühen sekretorischen Kompartiments. Störungen der KDEL-Rezeptor-vermittelten Rückholung können die Reifung von Glykoproteinen und die Empfindlichkeit gegenüber ER-Stress verändern – Prozesse, die häufig in Studien zu Neurodegeneration, metabolischem Stress und den sekretorischen Anforderungen von Tumorzellen genutzt werden. In Mausmodellen stellt Kdelr3 einen gut zugänglichen Ansatzpunkt dar, um zu untersuchen, wie ER–Golgi-Transport mit Proteostase-Netzwerken und Zellzustandsübergängen verknüpft ist.

Das KDEL receptor 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Kdelr3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Kdelr3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Kdelr3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KDEL receptor 3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Kdelr3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KDEL receptor 3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Kdelr3-Exone abzielen, die für die KDEL receptor 3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Kdelr3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KDEL receptor 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom KDEL receptor 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Kdelr3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KDEL receptor 3 HDR-Plasmid (m) und KDEL receptor 3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Kdelr3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Kdelr3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.