KDEL receptor 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-426263

Übersicht

Kdelr2 kodiert den KDEL-Rezeptor 2, einen im Golgi-Apparat lokalisierten Rückholrezeptor, der C‑terminale KDEL-ähnliche Motive auf löslichen Proteinen des ER-Lumens erkennt und deren retrograden Transport vom Golgi zurück in das endoplasmatische Retikulum über COPI-beschichtete Vesikel vermittelt. Indem er die Proteostase im ER sowie die korrekte Kompartimentierung von Chaperonen und Faltungsenzymen aufrechterhält, unterstützt KDEL-Rezeptor 2 die Integrität des sekretorischen Weges und begrenzt Stress-Signale, die mit der ER-Qualitätskontrolle verknüpft sind. Diese Trafficking-Achse überschneidet sich mit der Regulation der Unfolded-Protein-Response, der Reifung von Glykoproteinen und der Golgi-zu-ER-Recycling-Dynamik, die die zelluläre Anpassung an proteotoxischen Stress beeinflussen. Eine Fehlregulation des ER–Golgi-Transports und der Proteostase wurde mit Neurodegeneration, Stoffwechselstörungen und sekretorischem Remodeling in Krebszellen in Verbindung gebracht, wodurch Kdelr2 ein nützlicher Ansatzpunkt für mechanistische Studien ist.

Das KDEL receptor 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Kdelr2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Kdelr2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Kdelr2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die KDEL receptor 2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Kdelr2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der KDEL receptor 2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Kdelr2-Exone abzielen, die für die KDEL receptor 2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Kdelr2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom KDEL receptor 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom KDEL receptor 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Kdelr2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das KDEL receptor 2 HDR-Plasmid (m) und KDEL receptor 2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Kdelr2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Kdelr2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.