κ-casein Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406821

Visão geral

CSN3 codifica a κ-caseína, uma fosfoproteína secretada, classicamente caracterizada como um componente das micelas de caseína do leite, nas quais contribui para a solubilidade das proteínas e para a organização do fosfato de cálcio. Como glicoproteína extracelular, a κ-caseína sofre modificações pós-traducionais que influenciam as interações proteína–proteína e a dinâmica de secreção, servindo como um substrato modelo para estudar o processamento na via secretória e a clivagem proteolítica. Embora a biologia de CSN3 esteja melhor definida em contextos relacionados à lactação, variações na sequência e na glicosilação da κ-caseína têm sido associadas a alterações na estabilidade proteica e na geração de peptídeos bioativos, o que a torna relevante para estudos mecanísticos do processamento e da sinalização de proteínas extracelulares. Em sistemas humanos, CSN3 serve como um lócus tratável para investigar a regulação da expressão de proteínas secretadas e os efeitos, a jusante, de peptídeos derivados de proteólise sobre respostas celulares.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO κ-casein (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CSN3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CSN3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CSN3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína κ-casein.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CSN3 para a investigação da sinalização de κ-casein, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CSN3 críticos para a função κ-casein
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CSN3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo κ-casein Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo κ-casein Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CSN3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo κ-casein Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR κ-casein (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CSN3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CSN3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.