Plasmide CRISPR/Cas9 KO Kaiso (h): sc-417904

Présentation

ZBTB33 code Kaiso, un facteur de transcription à doigts de zinc contenant un domaine BTB/POZ, qui se lie à des sites de liaison Kaiso spécifiques de séquence ainsi qu’aux dinucléotides CpG méthylés afin de moduler des programmes d’expression génique. Par ses interactions avec des complexes corépresseurs et des composants de signalisation de la famille des caténines, Kaiso contribue à coordonner une répression transcriptionnelle dépendante de la chromatine et une commutation transcriptionnelle dépendante du contexte. Les réseaux régulés par Kaiso recoupent des voies contrôlant la différenciation épithéliale, l’adhérence cellule–cellule et les sorties transcriptionnelles associées à la voie Wnt/β-caténine. Une activité dérégulée de ZBTB33 ou une occupation altérée de Kaiso a été étudiée en biologie du cancer, où l’état épigénétique et le remodelage transcriptionnel contribuent à des phénotypes invasifs et à la progression tumorale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Kaiso (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZBTB33 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZBTB33, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZBTB33 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Kaiso.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZBTB33 pour l'étude de la signalisation de Kaiso, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZBTB33 essentiels à la fonction de Kaiso
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZBTB33 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Kaiso plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Kaiso plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZBTB33. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Kaiso plasmide HDR (h) et le Kaiso (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZBTB33 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZBTB33 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.