Plásmido CRISPR de Activación (h) KAI 1: sc-401317-ACT

CD82 (KAI1) es una glicoproteína de superficie celular de la familia de las tetraspaninas que organiza microdominios de membrana y modula la señalización al asociarse con integrinas, receptores de la familia EGFR y otras tetraspaninas. A través de la regulación de la adhesión, la migración y la dinámica del citoesqueleto, KAI1 influye en procesos como el tráfico de células inmunitarias, las interacciones con la matriz extracelular y la comunicación vesicular. CD82 ha sido ampliamente estudiada en el contexto de la biología de la metástasis, donde la expresión alterada se correlaciona con cambios en el potencial invasivo y con fenotipos asociados a la transición epitelio-mesenquimal. La desregulación de redes de señalización dependientes de CD82 también se ha vinculado con la progresión tumoral y la remodelación del microambiente inflamatorio en múltiples modelos de enfermedad.

KAI 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD82 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KAI 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD82 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD82, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KAI 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD82 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KAI 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KAI 1 en células tumorales con expresión de CD82 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.