Plasmide CRISPR d'Activation (h) JAK3: sc-400835-ACT

JAK3 (Janus kinase 3) est une tyrosine kinase non réceptrice qui s’associe à la chaîne γ commune (IL2RG) et transmet des signaux provenant de multiples récepteurs d’interleukines, notamment IL‑2, IL‑4, IL‑7, IL‑9, IL‑15 et IL‑21. Après stimulation par des cytokines, JAK3 active en aval des protéines STAT et coordonne des programmes transcriptionnels qui contrôlent le développement, l’activation et la survie des lymphocytes, reliant ainsi la signalisation JAK–STAT à l’homéostasie immunitaire. Une activité ou une expression dérégulée de JAK3 perturbe les réseaux de signalisation des cytokines et a été impliquée dans des phénotypes d’immunodéficience primaire ainsi que dans des signalisations aberrantes observées dans des hémopathies malignes. Parce que la fonction de JAK3 est étroitement couplée aux décisions de destinée des cellules immunitaires, elle est largement étudiée dans les voies qui régissent la biologie des lymphocytes T et des cellules NK, ainsi que la signalisation inflammatoire.

JAK3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de JAK3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

JAK3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus JAK3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription JAK3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de JAK3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus JAK3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de JAK3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie JAK3 dans les cellules tumorales présentant une expression de JAK3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.