Jagged2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401322-ACT

Il gene umano **JAG2** codifica **Jagged2**, un ligando ancorato alla membrana per i recettori **NOTCH** che media la segnalazione juxtacrina per regolare le decisioni di destino cellulare, l’impegno di linea e la patterning tissutale. L’attivazione di Notch guidata da Jagged2 influenza programmi trascrizionali che controllano proliferazione, differenziamento e apoptosi, con forti connessioni al mantenimento di cellule staminali/progenitrici e ai processi di sviluppo. Una deregolazione della segnalazione **JAG2/Notch** è stata associata ad alterazioni degli stati di differenziamento epiteliale ed ematopoietico ed è stata studiata in contesti quali la segnalazione oncogenica, la modulazione immunitaria e i disturbi dello sviluppo. In quanto nodo di via, Jagged2 è spesso utilizzato per indagare il crosstalk dipendente da Notch con le reti di segnalazione **Wnt**, **TGF-β** e infiammatorie.

Jagged2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di JAG2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Jagged2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus JAG2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione JAG2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Jagged2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus JAG2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Jagged2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Jagged2 nelle cellule tumorali con espressione di JAG2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.