Jagged1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421197

Übersicht

Jag1 kodiert den membrangebundenen Liganden Jagged1, einen kanonischen Aktivator von Notch-Rezeptoren, der juxtakrine Signalübertragung steuert und damit Zellschicksalsentscheidungen, Grenzbildung und Gewebemusterung in der Maus reguliert. Die Bindung von Jagged1 an Notch löst die proteolytische Freisetzung der intrazellulären Notch-Domäne aus und führt über RBPJ/CSL-Komplexe zu einer transkriptionellen Reprogrammierung, wodurch Prozesse wie Angiogenese, die Aufrechterhaltung von Stamm- und Vorläuferzellen sowie epithel-mesenchymale Interaktionen geprägt werden. In Entwicklungs- und Krankheitsmodellen ist eine veränderte Jag1/Notch-Signalgebung mit gestörter Differenzierung, aberrantem vaskulärem Remodelling und Veränderungen im Verhalten von Immun- und Stromazellen verbunden. Da die Notch-Ausgabe stark kontextabhängig ist, bietet ein Jag1-Loss-of-Function einen direkten Ansatz, ligandspezifische Signalschwellen und Pathway-Crosstalk in vivo und in kultivierten Zellen zu untersuchen.

Das Jagged1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Jag1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Jag1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Jag1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Jagged1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Jag1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Jagged1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Jag1-Exone abzielen, die für die Jagged1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Jag1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Jagged1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Jagged1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Jag1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Jagged1 HDR-Plasmid (m) und Jagged1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Jag1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Jag1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.