Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
ITM2B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421189
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ITM2B Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico ITM2B, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ITM2B Antibody (C-8): sc-374362
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ITM2B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-421189 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Itm2b codifica la proteina integrale di membrana ITM2B (nota anche come BRI2), una proteina transmembrana di tipo II coinvolta nel traffico di membrana e nella processazione proteolitica all’interno dei sistemi secretorio ed endolisosomiale. ITM2B contribuisce all’omeostasi neuronale ed è stata associata alla regolazione della produzione di peptidi amiloidogenici tramite interazioni che influenzano la processazione di APP. Nel topo, l’espressione di Itm2b è arricchita nel sistema nervoso ed è utilizzata per studiare le vie che governano il mantenimento sinaptico, il controllo qualità delle proteine e la funzione lisosomiale. Alterazioni della biologia di ITM2B sono associate a fenotipi legati alla neurodegenerazione e forniscono un punto di accesso meccanicistico per indagare lo squilibrio della proteostasi e la neuropatologia legata all’invecchiamento.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ITM2B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Itm2b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Itm2b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Itm2b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ITM2B.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Itm2b per lo studio della segnalazione di ITM2B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Itm2b critici per la funzione di ITM2B
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Itm2b per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal ITM2B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ITM2B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Itm2b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal ITM2B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ITM2B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Itm2b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Itm2b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.