Plásmido Doble Nickase (h) ITM1: sc-405155-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ITM1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ITM1 (h) y el plásmido de doble nickasa ITM1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a STT3A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ITM1 Anticuerpo (A-2): sc-390227
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ITM1 | sc-405155-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ITM1 | sc-405155-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
STT3A humano codifica la subunidad catalítica del complejo oligosacariltransferasa (OST), responsable de la glicosilación N‑ligada cotraduccional de polipéptidos nacientes en el retículo endoplásmico. Al transferir glicanos preensamblados a residuos de Asn dentro del motivo consenso (sequón), STT3A favorece el plegamiento de proteínas, el control de calidad y el tráfico intracelular, e influye en la homeostasis del RE y en la respuesta a proteínas mal plegadas. La alteración de la glicosilación dependiente de STT3A puede remodelar la maduración y la señalización de receptores, modificar la proteostasis de la superficie celular y afectar la capacidad de la vía secretora. La N‑glicosilación desregulada y las vías de estrés del RE están implicadas en diversos contextos patológicos, incluidos los trastornos congénitos de la glicosilación y la adaptación de la proteostasis asociada al cáncer, lo que convierte a STT3A en una diana útil para estudios mecanísticos.
ITM1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus STT3A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de STT3A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de STT3A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con STT3A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.