IRF-1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400551-LAC

Der Interferon-Regulationsfaktor 1 (IRF1) kodiert IRF-1, einen sequenzspezifischen Transkriptionsfaktor, der durch Interferone vom Typ I und II induziert wird und Programme angeborener und adaptiver Immunität koordiniert. IRF-1 reguliert Antigenpräsentation, antivirale Restriktion, Signalwege inflammatorischer Zytokine sowie Zellzyklus- und Apoptose-Checkpoints über Pfade wie die JAK-STAT-Signalübertragung und ISRE-abhängige (Interferon-Stimulated Response Element) Transkriptionsnetzwerke. Durch die Prägung der Makrophagenaktivierung, der T‑Zell-Differenzierung und der MHC-Expression beeinflusst IRF-1 die Immunüberwachung und Stressantworten, die bei Infektionen, Autoimmunität und krebsassoziierter Immunflucht häufig gestört sind. Eine fehlregulierte IRF1-Aktivität wurde außerdem mit veränderten DNA-Schadensantworten und kontextabhängigen tumorsuppressiven Phänotypen in Verbindung gebracht, was IRF1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die mechanistische Analyse von Signalwegen macht.

IRF-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente IRF1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

IRF-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der IRF1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen IRF-1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen IRF1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.