Integrin β5/ITGB5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421177
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Integrin β5/ITGB5 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Integrin β5/ITGB5-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Integrin β5/ITGB5: sc-398214
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Integrin β5/ITGB5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-421177 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Itgb5 kodiert Integrin β5, einen transmembranen Adhäsionsrezeptor, der überwiegend mit Integrin αV zu αVβ5 heterodimerisiert und so die Anheftung von Zellen an Liganden der extrazellulären Matrix wie Vitronectin ermöglicht. Über den Aufbau fokaler Adhäsionen und bidirektionale Signalübertragung moduliert αVβ5 die Umgestaltung des Zytoskeletts und aktiviert Signalwege einschließlich FAK/Src, PI3K–AKT und MAPK/ERK, die Migration, Überleben und Proliferation koordinieren. ITGB5 trägt außerdem zu endozytotischen und mechanotransduktiven Prozessen bei, die Gewebeumbau, angiogene Antworten und epithelial–mesenchymale Dynamiken beeinflussen. Fehlregulierte Integrinsignale und veränderte, β5-abhängige Adhäsionsprogramme wurden in Modellen für Fibrose, Tumorprogression und den Umbau entzündlicher Mikromilieus in Zusammenhang gebracht, was seine Eignung für mechanistische Studien zu adhäsionsgetriebenen Phänotypen unterstreicht.
Das Integrin β5/ITGB5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Itgb5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Itgb5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Itgb5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Integrin β5/ITGB5-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Itgb5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Integrin β5/ITGB5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Itgb5-Exone abzielen, die für die Integrin β5/ITGB5-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Itgb5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Integrin β5/ITGB5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Integrin β5/ITGB5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Itgb5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Integrin β5/ITGB5 HDR-Plasmid (m) und Integrin β5/ITGB5 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Itgb5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Itgb5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.