Integrin α4/ITGA4/CD49d Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401336-LAC

ITGA4 codifica l’integrina α4 (CD49d), una subunità α che eterodimerizza con β1 (VLA-4) o β7 per formare recettori di adesione fondamentali per il traffico dei leucociti e l’homing tissutale. Legandosi a ligandi quali VCAM1 e fibronectina, l’integrina α4 coordina interazioni cellula–cellula e cellula–matrice che regolano l’adesione stabile, la migrazione transendoteliale e l’organizzazione della sinapsi immunologica. La segnalazione di ITGA4 si integra con la dinamica delle adesioni focali e con chinasi a valle, tra cui le vie FAK/Src, PI3K–AKT e MAPK, modulando il rimodellamento del citoscheletro e segnali di sopravvivenza nelle cellule mobili. Un’attività deregolata dell’integrina α4 è stata associata al reclutamento di cellule infiammatorie e a patologie immuno-mediate, ed è ampiamente studiata nelle neoplasie ematopoietiche e nei processi metastatici, in cui l’adesione e le interazioni con la nicchia influenzano la biologia della malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale Integrin α4/ITGA4/CD49d (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ITGA4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Integrin α4/ITGA4/CD49d (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ITGA4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Integrin α4/ITGA4/CD49d. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ITGA4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.