Integrin α1/ITGA1/CD49a Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401275-ACT

ITGA1 codifica a integrina α1 (CD49a), uma subunidade α que se associa à integrina β1 para formar o receptor de colágeno/laminina α1β1 e mediar a adesão célula–matriz extracelular. Esse receptor regula a sinalização de adesões focais, a remodelação do citoesqueleto e vias a jusante como FAK/Src, MAPK/ERK e PI3K-AKT, que influenciam migração, sobrevivência e diferenciação. A atividade de ITGA1 contribui para a detecção da MEC, a mecanotransdução e a remodelação tecidual em contextos estromais e imunes, incluindo microambientes ricos em colágeno. A desregulação da sinalização da integrina α1 tem sido associada à remodelação fibrótica, ao tráfego de células inflamatórias e à invasão tumoral em múltiplos modelos relevantes para doenças, nos quais a composição da MEC e a sinalização de adesão estão alteradas.

Integrin α1/ITGA1/CD49a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin α1/ITGA1/CD49a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin α1/ITGA1/CD49a. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin α1/ITGA1/CD49a no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin α1/ITGA1/CD49a em células tumorais com expressão de ITGA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.